美国职业足球大联盟（英文：Major League Soccer，缩写：MLS），是美国及加拿大顶级足球联赛。MLS由二十一支美国球队及三支加拿大球队组成。赛季为三月至十二月，每支球队进行三十四场常规赛，胜者赢得支持者盾。东西部各七支常规赛战绩最佳的球队晋级季后赛，胜者赢得大联盟杯。MLS成立于1993年。1996年举行首届赛事。相较于由独立运作的各队所组成的联盟，MLS采单一实体架构（single-entity）运行，每一支球队都为联盟的投资者所有及控制。MLS为封闭会员制，为世上少数没有升降级制度的足球联盟。

1998年大联盟扩充到12支球队，增加了西部的芝加哥火焰和东部的迈阿密融合，2000年大联盟重划区域分为东部，中区和西部，芝加哥，坦帕湾，达拉斯和哥伦布被移到中部赛区，但是2001年两支佛罗里达州球队迈阿密融合和坦帕湾反叛解散了，大联盟又重回10支队伍，联盟也回到了东西两区的模式。

随着2004赛季的到来，大联盟扩充了美国芝华士和位于犹他盐湖城的皇家盐湖城，芝华士队和洛杉矶银河共用一个主场家得宝中心体育场（Home Depot Center），这两支球队被安排在西部赛区，而堪萨斯城巫师被移到东部。

2005赛季后圣何塞地震迁往休斯敦，改名为休斯敦1836（因为1836年是休斯敦建城之年）。不过由于1836年正是德克萨斯从墨西哥独立之年，在当地拉丁裔球迷抗议后，更名为休斯敦迪纳摩。

2006年红牛公司收购大都会明星队并将队名改为纽约红牛。

大联盟在2007赛季加入一支新球队多伦多FC，而2008赛季则有圣何塞地震重返大联盟。在2009年的西雅图海湾人及2010年费城联加入后，大联盟球队总数增至16队。

2010年11月，堪萨斯城巫师宣布于2011年赛季开始改称堪萨斯城体育俱乐部。另外2011年赛季也有温哥华白帽和波特兰木材加入大联盟比赛。另一支新球队蒙特利尔冲击则于2012年加入。

2015年赛季新增纽约城及奥兰多城两队，但美国芝华士解散退出，参赛球队总数为20队。

2017年赛季加入明尼苏达联及亚特兰大联，参赛队数增至22队。

FC洛杉矶及FC辛辛那提分别于2018及2019赛季加入，角逐联赛球队增至24队。

2020年赛季，大联盟将迎来SC纳什维尔及贝克汉姆作班主的国际迈阿密两支新球队，联赛增至26队。

另外大联盟亦已批准FC奥斯汀及夏洛特于2021年加入，到2022年则安排圣路易斯及萨克拉门托共和加盟。届时大联盟将会由30队角逐。

美职联一共有 24 队参赛，分为“东部”及“西部”，东、西部都是 12 队。